??????? 質(zhì)譜 (MS) 使研究人員能夠研究許多特性，例如樣品的分子量、結(jié)構(gòu)、特性、數(shù)量和純度。當(dāng)與液相色譜技術(shù)相結(jié)合能成為一種強(qiáng)大的分析工具，能夠從復(fù)雜的生物混合物（如牛奶、血清和全脂）中提取有關(guān)一系列化合物的有意義的數(shù)據(jù)，包括藥物代謝物、肽和蛋白質(zhì)-細(xì)胞裂解物。
??????? 一、液相色譜與質(zhì)譜
??????? 在將樣品引入 MS 儀器之前，通常通過(guò)過(guò)濾掉顆粒物、濃縮分析物、脫鹽和通常分離出可能導(dǎo)致背景離子或抑制電離的化合物來(lái)制備樣品。大多數(shù)情況下，許多或所有這些步驟都是由 HPLC、UPLC 系統(tǒng)完成的。樣品制備需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理。比如流動(dòng)相進(jìn)系統(tǒng)前，通過(guò)恒譜生溶劑過(guò)濾器過(guò)濾顆粒污染物。
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??????? HPLC、UPLC 這些系統(tǒng)可以在高壓/低流速下運(yùn)行，并且允許用戶(hù)通過(guò)直接連接、在線、與MS 通過(guò)電離裝置。如果是超高壓液相色譜系統(tǒng)，系統(tǒng)內(nèi)部壓力非常高，對(duì)于色譜耗材也需要uhplc專(zhuān)用。2.1#超高壓UPLC保護(hù)柱預(yù)柱捕獲樣品中增加背壓和影響基線噪音的污染物，延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。
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??????? 電離裝置的早期化身要求樣品在真空下電離，嚴(yán)重限制了可以分析的化合物的選擇。較新的技術(shù)，如電噴霧電離 (ESI)，現(xiàn)在可以在大氣壓下進(jìn)行電離，從而大大擴(kuò)展了曲目。一旦離子化，分析物（主要由水或質(zhì)子或電子的添加或損失產(chǎn)生的離子）將與中性（不帶電的）分子進(jìn)行機(jī)械和靜電分離。根據(jù)儀器的配置，允許所有或選定的子集通過(guò)檢測(cè)器，該檢測(cè)器繪制離子相對(duì)于信號(hào)強(qiáng)度（表示豐度）的 m/z 圖表。
??????? 二、串聯(lián)質(zhì)譜
??????? 從單級(jí) MS 獲得的 m/z 信息非常有價(jià)值，有時(shí)可用于識(shí)別小分子。但對(duì)于更大、更復(fù)雜的分子，通常需要互補(bǔ)的結(jié)構(gòu)信息。通過(guò) LC/MS 分析復(fù)雜的蛋白質(zhì)混合物通常從胰蛋白酶消化過(guò)夜以產(chǎn)生肽開(kāi)始，然后通過(guò)收集串聯(lián) MS 數(shù)據(jù)在肽水平鑒定蛋白質(zhì)。
???????? 在串聯(lián) MS 中，樣品依次通過(guò)儀器的不同階段，每個(gè)階段都會(huì)對(duì)其進(jìn)行選擇或破碎等過(guò)程。例如，在三重四極桿 MS 中，第一階段選擇特定的 m/z 范圍，丟棄其余部分。然后，這些剩余的離子通過(guò)在第二階段與中性分子碰撞而碎裂。新破碎的離子然后進(jìn)入第三階段，根據(jù)實(shí)驗(yàn)，掃描產(chǎn)物離子的光譜或選擇性地監(jiān)測(cè)一些離子。然后將這些光譜與實(shí)際或理論光譜數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比較，以確定它們的身份，使研究人員能夠?qū)⑺鼈儊?lái)自的母分子拼湊在一起。
??????? 三、LC/MS 的其他用途
??????? LC/MS 的強(qiáng)大功能也經(jīng)常用于識(shí)別蛋白質(zhì)修飾，例如磷酸化和二硫鍵橋接。在 LC 提供的分離和串聯(lián) MS 丟棄非分析物離子的能力之間，LC/MS 是許多不同應(yīng)用的選擇。
發(fā)布于: 2022-03-25